Методика определения щелочной фосфатазы в лейкоцитах

Методика определения щелочной фосфатазы в лейкоцитах

Щелочная фосфатаза определяется по методу Гомори. Мазки фиксируются в 80°-ном спирте в течение 24 часов при температуре 4° С. Фиксированные мазки переносятся в буферный раствор следующего состава: а) 2%-ный раствор глицерофосфата натрия — 2,5 ч., б) 2%-ный раствор барбитуровокислого натрия (мединала) — 2 ч.; в 2%-ный раствор хлористого кальция — 1 ч.: г) ‘/so М раствор хлористого магния — 6 ч.; дистиллированная вода — 0,5 ч. Мазки выдерживаются в буферном растворе при температуре 37° С 20 часов. После промывания дистиллированной водой переносятся в 2%-ный раствор хлористого кобальта на 2 минуты, вновь тщательно промываются дистиллированной водой, после чего помещаются в очень слабый раствор хлористого аммония (5 капель концентрированного раствора на 150 мл воды). После промывания водой мазки докрашиваются светло-зеленой краской.

Л. И. Казанова с сотр. исследовала содержание щелочной и кислой фосфатаз в клетках костного мозга и периферической крови и пришла к заключению, что щелочная фосфатаза выявляется в виде следов в незрелых элементах костного мозга (миелобластах, миелоцитах). По мере созревания нейтрофилов реакция становится более отчетливой. Нейтрофилы костного мозга дают более выраженную реакцию, чем гранулоциты периферической крови.

Некоторым подтверждением влияния гормонов на содержание щелочной фосфатазы в лейкоцитах могут служить интересные наблюдения Ваннотти, который обнаружил разное содержание щелочной фосфатазы в лейкоцитах мужчин и женщин. У женщин в период половой активности содержание щелочной фосфатазы в лейкоцитах значительно выше, чем у мужчин. В период же менопаузы и у девочек до периода полового созревания лейкоциты содержат такое же количество фосфатазы, как и гранулоциты мужчин.

Фосфатаза принимает активное участие в обменных процессах, катализируя обмен нуклеиновых кислот, белков и липидов, а также участвуя в синтезе фосфорных соединений и их эстеров. Что же касается кислой фосфатазы, то ее не удалось выявить в незрелых клетках костного мозга; она была найдена в. небольшом количестве (в виде следов) в ядрах некоторых нейтрофилов костного мозга и периферической крови. Однако Керполла указывает, что кислая фосфатаза при тщательно проведенном исследовании выявляется и в молодых элементах гранулоцитопоэза, начиная с миелоцитов. Он наблюдал отчетливое нарастание кислой фосфатазы у больных гипопластической анемией. Особенно много кислой фосфатазы было в разрушающих нейтрофилах. Поэтому автор высказывает предположение о значении кислой фосфатазы в процессах разрушения нейтрофилов. Как большинство других авторов, Л. И. Казанова с соавторами нашла значительное понижение активности щелочной фосфатазы при лейкозах, тогда как активность кислой фосфатазы особенно не менялась.

Резкое снижение процента нейтрофилов, содержащих щелочную фосфатазу, у больных лейкозами позволяет считать лейкоциты этих больных функционально неполноценными

Все приведенные данные свидетельствуют о высокой функциональной активности нейтрофилов крови, обеспечивающей эффективную борьбу с инфекциями. Надо думать, что при патологических процессах эта функция нейтрофилов должна нарушаться. Однако в этом отношении еще очень мало фактических данных.